.RU

«ga-40»




СОДЕРЖАНИЕ


Список сокращений 4

I. Исследование иммунотропной активности GA-40 5-24

1. Исследование in vivo

1.1. Влияние различных доз препарата «GA-40» на накопление антитело образующих клеток (АОК) и массу и клеточностьезенки у мышей 5

1.2. Влияние различных доз препарата «GA-40» на реакцию ги­пер­чувс­твительности замедленного типа (ГЗТ) у мышей 6

1.3. Влияние различных доз препарата «GA-40» на фагоцитарную и бак­те­ри­цидную активность клеток перитонеального экссудата мышей 7

2. Исследование in vitro

2.1 Оценка люминолзависимой и люцигенинзависимой хемил­юми­нес­ценции нейтрофилов человека под влиянием препарата «GA-40» 10

2.2 Влияние различных доз препарата «GA-40» на цитотоксическую
ак­тивность NK-клеток периферической крови человека 12

2.3 Влияние различных доз препарата «GA-40» на пролиферативную
активность лимфоцитов периферической крови человека 14

2.4 Влияние различных доз препарата «GA-40» на продукцию ци­то­ки­нов мононуклеарными клетками периферической крови человека 17

Обсуждение результатов 21

Выводы 23

^ II. Оценка иммунотоксическго действия «GA-40» 25-37

1. Определение массы и клеточности органов иммунной системы 25

2. Определение фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов 26

3. Определение активности нейтрофилов в тесте хемилюминесценции 26

Влияние «GA-40» на гуморальный иммунитет 28

Влияние «GA-40» на клеточный иммунитет 29

Выводы 31


III Оценка аллергизирующих свойств «СА-40» 38-43

1. Изучение аллергизирующих свойств «GA-40» 38

2. Оценка анафилактической активности «GA-40» 39

3. Влияние «GA-40» на конканавалин А-индуцированную реакцию воспаления 40

4. Реакция гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). 41

5. Заключение 42

^ IV. Изучение мутагенной активности «GA-40» 43-52

V. Изучение репродуктивной токсичности препарата СА-40 53-72

VI. Исследование клеточных и молекулярных механизмов действия

пре­па­ра­та GA-40 73-88

VII Определение общетоксического действия GA-40 в хроническом
эксперименте 89-115

VIII. Заключение 116-117

^ СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ


FACS - fluorescence activated cells sorter (проточный цитофлуориметр)

АОК - антителообразующие клетки

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ДМСО - диметилсульфоксид

ИМ - индекс модуляции

ИФН-гамма - интерферон гамма

ЛПС - липополисахарид

МНК - мононуклеарные клетки

ПКС - полная культуральная среда

ФГА - фитогемаглютинин

ФИТЦ - флюоресцеина изотиоцианат

ФНО-альфа - фактор некроза опухолей-альфа

ФСБ - фосфатно-солевой буфер

ХЛ - хемилюминисценция

ЭБ - эритроциты барана

ЯСК - ядросодержащие клетки

«Исследование иммунотропной активности препарата GА-40».

^ 1. Исследование vivo

Исследование проведено на мышах-гибридах (CBAхC57B1/6)F1 с массой тела 22,3+0,4 грамма.

1.1 Влияние различных доз препарата «GA-40» на накопление анти­телообразующих клеток (АОК) и массу и клеточность селезенки у мышей

Материалы и методы

Препарат разводили водой для инъекций (растворитель) и в объеме 200 мкл, в дозах 0,04, 0,4 и 4 мкг (что соответствует 2, 20 и 200 мкг/кг) вводили мышам подкожно за 3 часа до иммунизации их эритроцитами барана в дозе 5x106 в/бр в объеме 500 мкл. Контрольным животным вместо препарата вводили воду для инъекций и также иммунизировали их ЭБ. Формировали, таким образом, 4 группы по 10 мышей. На 4 сутки методом локального гемолиза в геле агарозы определяли количество антителообразующих клеток в селезенках. Оценивали также массу селезенок и подсчитывали количество ядросодержащих клеток (ЯСК) в них. Результаты выражали в виде числа АОК на селезенку, на 1 миллион ЯСК селезенки и виде индекса модуляции (ИМ) иммунного ответа по сравнению с контрольной группой.

Результаты

Установлено, что введение препарата GA-40 мышам не приводит к изменению показателей массы и клеточности селезенки по сравнению с контрольными животными (табл.1).

Таблица 1. Показатели массы тела, селезенки, количества ядросодержащих клеток у иммунизированных мышей, получавших GA-40 (M±sd).

^ Обработка животных

Масса тела

(г)

Масса

селезенки (г)

Ядросодержащие

клетки, млн/селезенку

Препарат

Антиген

Вода для инъекций

+ ЭБ

23,4±0,45

0,768±0,02

221±9,9

GA-40, мкг/мл


0,04

+ ЭБ

23,6± 0,58

0,828±0,03

221±7,6

0,4

+ ЭБ

23,6±0,39

0,809±0,02

241+6,1

4

+ ЭБ

22,6±0,40

0,786+0,02

223±6,8


В дозах 0,4 и 4 мкг на мышь введение препарата приводит к выраженной стимуляции гуморального иммунного ответа. Количество АОК увеличивается более чем в два раза. Даже в минимальной дозе (0,04 мкг/мышь) препарат вызвал достоверное, полуторократное увеличение числа АОК (табл.2). Максимальный эффект наблюдался при использовании дозы 0,4 мкг/мышь. Результаты пересчета АОК на количества ядросодержащих клеток в селезенке свидетельствуют, что полученный иммуностимулирующий эффект реализуется не за счет увеличения числа ЯСК в селезенках, а за счет увеличения в них количества активных антителопродуцентов.

Таблица 2. Влияние препарата GA-40 на накопление антителообразующих клеток у мышей.

^ Обработка животных

Количество антителообразующих клеток на селезенку, (М±sd)

Количество антителообразующих клеток на млн ядросодержащих клеток селезенки,

(М±sd)

Препарат

Антиген

абсолютное

Индекс модуляции

абсолютное

Вода для инъекций

+ ЭБ

583±118

1,00 ±0,18

2,6 + 0,48

GA-40,

м кг/мл

0,04

+ ЭБ

920 ±126

1,47 ±0,24*

3,8 ± 0,62*

0,4

+ ЭБ

1510± 199

2,43 ± 0,37*

5,8 ±0,88*

4

+ ЭБ

1136+130

2,04 ± 0,22*

5,3 ± 0,58*

* - достоверные отличия по сравнению с контрольной группой, р<0,05.

1.2 Влияние различных доз препарата «GА-40» на реакцию гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у мышей

Материалы и методы

Препарат вводили в объеме 200 мкл, в дозах 0,04, 0,4 и 4 мкг на мышь. Животным контрольной группы вводили вместо препарата 200 мкл растворителя (вода для инъекций). Мышей иммунизировали подкожно (в холку) эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 2x108 через 3 часа после подкожного введения препарата. На 5 сутки в левую («опытную») лапку мышей опытных и контрольной группы проводили разрешающую инъекцию антигена (ЭБ) в дозе 1x108 в объеме 50 мкл. В другую лапку («контрольная») в том же объеме вводили физиологический раствор. Разрешающей инъекции были подвергнуты также не иммунизированные, но получавшие растворитель мыши (отрицательный контроль реакции). Через 24 часа регистрировали ответ путем определения массы «опытной» и «контрольной» лап. Индекс реакции выражали в процентах прироста массы лапки, в которую вводили ЭБ, по отношению к массе «контрольной» лапки.

Результаты

Полученные результаты свидетельствуют, что GA-40 не влияет на выраженность ГЗТ к эритроцитам барана (табл.3).

Таблица 3. Влияние препарата «GA-40» на реакцию гиперчувствительности замедленного типа к эритроцитам барана у мышей.

^ Обработка животных

Масса тела

(г)

Масса

опытной лапы (мг)

Масса

контрольной лапы (мг)

Индекс

реакции

Препарат

Антиген

-

Физ. раствор

24,3+0,43

127,6+2,49

135,7+2,84

6,38±1,36

Вода для инъекций (Контроль)

+ЭБ

22,6+0,70

123,4+2,80

154,8+1,46

25,38±2,23

GA-40, мкг/мышь

0,04

+ЭБ

25,1+1,32

124,0±4,47

151,9±5,36

22,7+1,98

0,4

+ЭБ

23,2+0,49

124,0+2,52

153,4±3,69

23,79±2,38

4

+ЭБ

23,8+0,50

125,6+2,98

159,7+4,28

27,16±1,75

Таким образом, проведенное исследование выявило выраженную стимуляцию антителообразования под действием препарата GA-40 при его введении экспериментальным животным во всех исследованных дозах (0,04, 0,4 и 4 мкг/мышь). Введение препарата экспериментальным животным в тех же дозах не оказало влияния на развитие реакции ГЗТ к эритроцитам барана.

1.3 Влияние различных доз препарата «GA-40» на фагоцитарную и бактерицидную активность клеток перитонеального экссудата мышей

Материалы и методы.

^ Получение клеток перитонеального экссудата

Препарат вводили подкожно (в холку) в объеме 500 мкл, в дозах 0,04, 0,4 и 4 мкг на мышь. Животньм контрольной группы вводили вместо препарата 500 мкл растворителя (вода для инъекций). В каждой группе было по 10 мышей. Через 24 часа после введения «GA-40» мышей забивали и промывали брюшную полость 5 мл физиологического раствора. Затем клетки перитонеального экссудата отмывали, подсчитывали в камере Горяева и доводили концентрацию до 2 млн/мл физиологическим раствором.

Меченые бактерий

Для постановки фагоцитоза и реакции внутриклеточного киллинга использовали St.aureus, меченый флюоресцеина изотиоционатом (ФИТЦ, Sigma). Суточную культуру St.aureus смывали фосфатно-солевым буфером (ФСБ,15М NaC1, 1М К2НРО4, 1М КН2РО4, рН 7,4). Для фагоцитоза бактерии убивали нагреванием на водяной бане при 100°С в течение 40 мин. Стафилококк дезинтегрировали с помощью ультразвука на УЗ-бане (51 кГц, 90W) 2 часа. Осаждали при 1000g 25 мин. и отмывали 10 мл ФСБ. Второй раз отмывку проводили 0,1М карбонатно-бикарбонатным буфером, рН 9,5 (КББ). Ресуспендировали в этом же буфере и по стандарту мутности концентрацию бактерий доводили до 100 млн/мл. К суспензии добавляли свежеприготовленный раствор ФИТЦ: для убитых бактерий - 0,1 мг/мл, для живых - 1 мг/мл. Для мечения стафилококка его выдерживали с ФИТЦ в течение 12-16 часов при +4°С в темноте. Затем бактерии трижды отмывали ФСБ (режим центрифугирования -1000g 25 мин.), ресуспендировали в ФСБ с добавлением 5% эмбриональной телячьей сыворотки (ПанЭко) и 5% ДМСО (Sigma). Концентрацию бактерий доводили до 500 млн./мл с помощью Tru Count пробирок (Becton Dickinson) с известным количеством (52800 шт.) микробусинок. Аликвоты хранили при -70°С.

Оценка фагоцитарной активности

Смешивали клетки перитонеального экссудата ФИТЦ-меченым стафилококком в соотношении 1:50 и инкубировали 30 мин. при 37°С в присутствии 10% мышиной сыворотки. Затем отмывали от несвязавшихся бактерий путем дифференцированного центрифугирования на низких оборотах (200g - бактерии не оседают). Пробы переносили в цитометрические пробирки и добавляли 1% раствор параформальдегида (Sigma) для фиксации клеток.

Пробы анализировали на проточном цитофлуориметре FACS Calibu (Becton Dickinson) в программе CellQuest. На Dotplot по параметрам переднего (FSC) и бокового (SSC) светорассеяния выделяли облако клеток перитонеального экссудата и анализировали флюоресценцию на канале FL1(535 нм). Оценивали процент клеток с высокой флюоресценцией на канале FL1 (клетки, поглотившие меченый стафилококк).

Оценка внутриклеточной бактерщидности

Смешивали клетки перитонеального экссудата ФИТЦ-меченым стафилококком в соотношении 1:50 и инкубировали 20 мин. при 37°С в присутствии 10% мышиной сыворотки. Затем дважды отмывали клетки от несвязавшихся бактерий путем дифференцированного центрифугирования на низких оборотах (200g - бактерии не оседают). Клетки перитонеального экссудата ресуспендировали в 200 мкл ФСБ и инкубировали еще 1 ч при 37°С. Затем их осаждали (200 g Шин.) и разрушали 200 мкл 0,2% сапонина (Sigma) на 0,01М карбонатно-бикарбонатном буфере с рН 9,5 в течение 5 мин. Высвободившиеся бактерии осаждали 2000 g 10 мин. Для разделения живого и убитого стафилококка в пробы добавляли иодид пропидиума (И) в концентрации 2,5 мкг/мл (Sigma), который окрашивает только мертвые клетки, и анализировали на проточном цитофлуориметре FACS Calibur. На DotPlot по параметрам переднего (Р8С) и бокового (88С) светорассеяния выделяли облако стафилококка и анализировали флюоресценцию на каналах FL1(535 нм) и FL3(585 нм). Оценивали процент клеток с двойной меткой (погибший стафилококк) по отношению к общему числу клеток.

Результаты.

Из результатов, представленных в таблице 4 видно, что препарат «GA-40» вызвал повышение фагоцитарной активности клеток перитонеального экссудата мышей при использовании доз 0,4 и 4 мкг/мл. Причем последняя вызвала статистически достоверное повышение показателя на 20 %.

Повышение фагоцитарной активности под действием препарата сопровождалось снижением бактерицидной активности. Достоверный эффект подавления наблюдался при использовании максимальной дозы «GA-40» (табл.4).

Таблица 4. Влияние препарата «GA-40» на фагоцитарную и бактериальную активности клеток перитонеального экссудата мышей.

^ GA-40, мкг/мышь

Фагоцитарная активность

(% клеток, поглотивших St.Aureus), М±sd

Бактерицидная активность (% погибшего St.aureus), М±sd

0

67,9±9,52

22,3±2,76

0,04

66,4±4,10

20,8±3,01

0,4

71,1±8,04

20,6±3,78

4

81,0±4,78*

18,5±2,56*

* - достоверные различия по сравнению с контрольной группой (0 мкг/мышь), р<0.05

Т.о., введение препарата «GA-40» мышам в дозах 2, 20 и 200 мкг/кг вызывало повышение фагоцитарной и снижение бактерицидной активностей клеток перитонеального экссудата, достоверно проявившееся при использовании максимальной дозы.

^ 2. Исследования in vitro

Вся работа проводилась на образцах венозной крови здоровых добровольцев. Забор крови производился утром натощак из локтевой вены в пробирку с антикоагулянтом, в качестве которого применяли гепарин в концентрации 10 Ед/мл.

2.1 Оценка люминолзависимой и люцигенинзависимой хемилюминесценции нейтрофилов человека под влиянием препарата «GA-40»

Материалы и методы

Метод основан на способности нейтрофилов при активации резко изменять метаболический профиль, проявляющийся в усилении потребления кислорода, активации гексозомонофосфатного шунта, мембраносвязанной NADP/H-оксидазы, других ферментов и выделение из клеток активных кислородных радикалов. Анализ хемилюминисценции (ХЛ) нейтрофилов выявляет образование клетками активных кислородных радикалов, включая супероксидный анион, синглетный кислород, гидроксильный радикал, перекись водорода. Образуемые кислородные метаболиты обладают выраженными бактерицидными свойствами.

Для усиления ХЛ применяются люминол (Sigma), обладающий свойством окисляться под влиянием кислородных метаболитов и генерировать квант света (440 нм), что существенно повышает чувствительность реакции. Люминолзависимая ХЛ в большей степени отражает продукцию Н2О2.

Выделение лейкоцитов

К 4 мл гепаринизированной крови добавляли 2 мл 3% желатины на фосфатно-солевом буфере (ФСБ) (0.15M NaCl, 1M К2НРО4, 1М КН2РО4, рН 7,4), перемешивали и инкубировали в течение 10-15 минут при 37°С для осаждения эритроцитов. Лейкоциты из надосадочной жидкости отбирали и двукратно отмывали в ФСБ. Концентрацию лейкоцитов доводили до 2млн/мл по сегментоядерным нейтрофилам.

Оценка хемилюминесценции

В полистироловые пробирки добавляли 200 мкл ФСБ, 100 мкл люминола в концентрации 0,1 мг/мл, 100 мкл лейкоцитов, раствор препарата в конечных концентрациях 100, 10 и 1 мкг/мл, реакцию проводили в дублях. После

предварительной инкубации лейкоцитов с различными дозами препарата измеряли ХЛ при помощи хемилюминометра LUCY 1 (Австрия). Регистрировали пик хеми­люминесценции. Затем в пробы добавляли зимозан (Sigma), опсонизированный смешанной сывороткой доноров, до конечной концентрации 0,5 мг/мл и измеряли стимулированную ХЛ в течение 10-15 минут. Регистрировали пиковые значения ХЛ.

Таблица 5. Влияние препарата GA-40 на люминолзависимую не индуцированную зим­озаном хемилюминесценцию лейкоцитов здоровых доноров, указана хемил­юми­несценция, mV/мин.


№ донора



GA-40, мкг/мл

0

1

10

100

1

36,2

27,4

25,8

18,2

2

25,6

24,2

14,3

7,5

3

28,7

26,8

13,4

10,1

4

32,7

30,8

25,4

19,1

5

24,6

19,6

10,2

5,8

6

37,8

34,6

25,2

10,8

7

26,2

22,4

14,8

8,2

М±sd

30,3±5,33

26,5±5,08

18,4±6,73*

11,4±5,23*

* - р<0,05, достоверные различия по сравнению с контролем (GA-40 - 0 мкг/мл)

Таблица 6. Влияние препарата GA-40 на люминолзависимую индуцированную зимозаном хемилюминесценцию лейкоцитов здоровых доноров, указана хемилюминесценция, mV/мин.

№ донора



GA-40, мкг/мл + зимозан

0

1

10

100

1

313

216

187

79

2

330

250

249

92

3

357

321

262

84

4

143

131

109

34

5

307

272

190

62

6

254

248

186

70

7

290

236

198

73

М±sd

284,9±70,27

239,1±58,04

197,3±49,91*

70,6±18,83*

* - р<0,05, достоверные различия по сравнению с контролем (GA-40 - 0 мкг/мл)

Результаты

Совместная инкубация препарата «GA-40» с лейкоцитами периферической крови человека вызвала дозозависимое подавление как не стимулированной, так и индуцированной зимозаном ХЛ (табл.5,6, рис.1).

Статистически достоверный эффект наблюдался при использовании концентраций 10 и 100 мкг/мл. Не индуцированная ХЛ в этих случаях снизилась на 40 и 62% (табл.5, рис.1), индуцированная зимозаном на 31 и 75% (табл.6, рис.1) для 10 и 100 мкг/мл соответственно.



Рисунок 1. Влияние препарата «GA-40» на люминолзависимую хеми­люми­несценцию лейкоцитов здоровых доноров.

^ 2.2 Влияние различных доз препарата «GA-40» на цитотоксическую активность NK-клеток периферической крови человека

Материалы и методы

Выделение мононуклеарных клеток периферической крови человека Мононуклеарные клетки (МНК, эффекторы) выделяли с помощью одноступенчатого градиента плотности фиколл-верографин (ПанЭко) (d=1.077. Для этого гепа­ринизированную кровь разводили в два раза средой 199 (ПанЭко) и наслаивали на фиколл. Пробирки помещали в центрифугу с программным управлением "Joan BR4" и центрифугировали 40 минут 400g. Клетки в интерфазе стерильно собирали и дважды отмывали в среде 199. Жизнеспособность клеток после выделения составляла 98%-99% (по методу окраски 0,1% раствором трипанового синего (Serva)). После второй отмывки МНК разводили до концентрации 5 млн/мл в полной культуральной среде (ПКС, RPMI-1640 (ПанЭко) с добавлением 10% инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки (Hyclon), 10мМ HEPES-буфера (Sigma), 2мМ L-глутамина (ПанЭко) и 40 мкг/мл гентамицина (KRKA)).

Цитотоксический тест

В качестве мишеней в работе была использована человеческая эритромиелоидная линия К-562. В опыте использовали клетки на 2-й день после пересева. Мишени (2млн/мл) инкубировали при +37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 1 часа в присутствие ЗH-уридина (ЮмкКюри/лунку) в обьеме 2мл в 24-х луночном планшете (Costar). Затем клетки собирали, отмывали в среде 199, ресуспендировали в 5 мл среды 199 и оставляли в СО2-инкубаторе еще на 1-3 часа. Эту процедуру проводили с целью избавления от неспецифически связавшейся метки. По окончании инкубации клетки отмывали дважды и разводили до концентрации 100тыс/мл.

Для цитотоксического теста смешивали эффекторы и мишени в соотношении 50:1 в обьеме 200мкл в круглодонном 96-луночном планшете (Costar). «G-40» добавляли к эффекторам и мишеням на весь срок инкубации в концентрациях 1, 10 и 100 мкг/мл. В качестве контроля определяли спонтанный выход метки из мишеней, для чего вместо эффекторов добавляли к мишеням соответствующий объем ПКС. Постановку осуществляли в триплетах. Планшет центрифугировали при 500об/мин в течение 2 мин для достижения плотного контакта между эффекторами и мишенями и помещали в СОг-инкубатор на 16 часов. По окончании культивирования клетки переносили на миллипоровые фильтры "Titertek"(Flow). Фильтры высушивали в течение ночи и переносили во флаконы с 5мл сцинциляционной жидкости.

Радиометрию проводили на счетчике "B-Trac"(США), оценивали число излучаемых импульсов за 1 минуту. Данные по триплетам усредняли.

Подсчет специфического лизиса клеток-мишеней (в%) проводили по формуле:

%лизиса = ((А-В)/А) *100,

где А - радиоактивная метка в контроле (инкубация без эффекторов), В -радиоактивная метка в опытных пробах.

Результаты

Из результатов представленных в таблице 7 видно, что концентрации «GA-40» 1 и 10 мкг/мл не оказали значимого эффекта на циsтотоксическую активность NK-клеток, однако доза препарата 100 мкг/мл достоверно снизила этот показатель на 52%.

Таблица 7. Влияние различных доз препарата «GA-40» на цитотоксическую активность NK-клеток здоровых доноров, указан % лизированных мишеней.



Донора



GA-40, мкг/мл

0

1

10

100

1

55,7

59,3

55,8

37,6

2

63

64,4

62,9

53,2

3

65

67

55,7

46,5

4

52,9

61,6

51

42,1

5

84,6

72,8

61,4

0

6

55,09

38,5

43,1

0

7

81

62,5

65,5

36,6

8

79,3

70,5

64,6

42,4

9

44,6

42,1

53,4

20,7

10

44,7

46,6

57,4

25,2

М±m

62,6±14,72

58,5±11,98

57,1±6,91

30,4±18,62*

* - р<0,05 по сравнению с контролем (GA-40 - 0 мкг/мл).

^ 2.3 Влияние различных доз препарата «GA-40» на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови человека

Материалы и методы

Мононуклеарные клетки выделяли как описано в главе 2.2.

Постановка реакции бласттрансформации

Мононуклеары культивировали в объёме 150 мкл в ПКС в 96-луночных круглодонных планшетах (Costar) в количестве 105 кл/лунку при 37° С в атмосфере 5% CO2 в течение 72 часов в присутствие или без стимуляторов: фитогемаглютинин (ФГА, Sigma) 5 мкг/мл в качестве положительного контроля, «GA-40» 1, 10 и 100 мкг/мл, ФГА (5 мкг/мл) + «GA-40» (1,10 или 100 мкг/мл) для оценки влияния препарата на индуцированную пролиферацию. В качестве контроля использовали клетки, инкубированные только в присутствии ПКС. Постановку осуществляли в триплетах. За 6 часов до окончания реакции в каждую лунку добавляли 3Н-тимидин в концентрации 1мкКюри на лунку. По окончании реакции клеточную взвесь переносили на миллипоровые фильтры "Titertek"(Flow). Фильтры высушивали в течение ночи и переносили во флаконы с 5 мл сцинциляционной жидкости. Радиометрию проводили на счетчике "B-Trac"(США), оценивали число излучаемых импульсов за 1 минуту. Данные по триплетам усредняли.

Результаты

Результаты представлены в таблицах 8, 9 и рис.2. и 3. При совместном культивировании МНК с различными дозами препарата было обнаружено дозозависимое подавление пролиферативной активности лимфоцитов как индуцированной ФГА, так и не индуцированной. Статистически достоверный эффект наблюдался при использовании 100 мкг/мл «GA-40» - снижение показателя на 54 и 37% для не индуцированной и индуцированной ФГА пролиферации соответственно.

Таблица 8. Влияние препарата GA-40 на не индуцированную ФГА пролиферативную активность лимфоцитов здоровых доноров, имп/мин.




донора

GA-40, мкг/мл

glava-5-zakoni-socialnoj-organizacii-uchebnoe-posobie-moskva-2004-avtori-doktor-voennih-nauk-professor-medvedev.html
glava-5-zashita-avtorskih-i-smezhnih-prav-uchebnik-bliznec-i-a-leontev-k-b-pod-red-i-a-blizneca-.html
glava-5-zdes-eto-tam-a-togda-eto-sejchas-dvigayas-skvoz-vremya-i-prostranstvo-v-bozhestvennoj-matrice.html
glava-5-zhenskij-vopros-cherep-mutanta.html
glava-5-zhizn-posle-smerti-aleksej-valerevich-isaev-neizvestnij-1941-ostanovlennij-blickrig.html
glava-50-angeli-i-demoni-den-braun-perevod-s-anglijskogo-g-kosova-ocr-wlad-i-denis-anons.html
  • crib.bystrickaya.ru/i-vipolnite-sleduyushie-uprazhneniya-metodicheskie-rekomendacii-po-organizacii-samostoyatelnoj-raboti-studentov-zaochnogo-otdeleniya.html
  • lektsiya.bystrickaya.ru/programma-mezhdunarodnoj-nauchno-prakticheskoj-konferencii-po-problemam-fizicheskoj-kulturi-i-sporta.html
  • crib.bystrickaya.ru/instrukciya-po-primeneniyu-maz-sernaya.html
  • occupation.bystrickaya.ru/nuzhno-li-verit-v-troicu-n-v-porublev.html
  • knigi.bystrickaya.ru/rinochnaya-ekonomika-harakterizuetsya-kak-sistema-osnovannaya-na-chastnoj-sobstvennosti-svobode-vibora-i-konkurencii-ona-opiraetsya-na-lichnie-interesi-ogranichivaet-rol-pravitelstva.html
  • knowledge.bystrickaya.ru/modul-nash-klass-metodicheskoe-posobie-k-iumk-novaya-nachalnaya-shkola.html
  • credit.bystrickaya.ru/polozhenie-o-profilnih-klassah-v-shkole-starshej-stupeni.html
  • university.bystrickaya.ru/gde-berut-nachalo-molochnie-reki-tema-vse-novosti-monitoring-i-analiz-smi-v-gorode-kirov-data-10-04-2011.html
  • student.bystrickaya.ru/102-kontrol-virazheniya-svoih-emocij-glavnij-redaktor-zav-psihologicheskoj-redakciej-zam-zav-psihologicheskoj-redakciej.html
  • writing.bystrickaya.ru/bronhialnaya-astma-etiologiya-patologicheskaya-anatomiya-i-patogenez.html
  • grade.bystrickaya.ru/mup-vodokanal-nacelilos-na-stolichnie-trubi-mk-v-arhangelske18012006.html
  • assessments.bystrickaya.ru/duhovnoe-sirotstvo-yunih-iz-dialoga-bibliotekarya-i-izdatelya-detsko-yunosheskaya-biblioteka-respubliki-kareliya-bibliotechnij.html
  • universitet.bystrickaya.ru/tema-15-kulturnoe-nasledie-starinnih-usadeb-uchebno-metodicheskoe-posobie-dlya-studentov-geograficheskogo-fakulteta-brest.html
  • klass.bystrickaya.ru/antivirusnij-kompleks-dlya-checkpoint-firewall-antivirusnij-kompleks-dlya-zashiti-shlyuzov-kak-pravilo-vklyuchaet-v-sebya.html
  • znanie.bystrickaya.ru/a-s-pushkin-spiski-hudozhestvennoj-literaturi-rekomenduemoj-dlya-letnego-chteniya.html
  • zadachi.bystrickaya.ru/organizaciya-sbita-gotovoj-produkcii-na-oao-zavode-kometa.html
  • kolledzh.bystrickaya.ru/41-vliyanie-proekta-na-sostoyanie-okruzhayushej-sredi-i-plan-meropriyatij-po-umensheniyu-vrednogo-vozdejstviya.html
  • uchitel.bystrickaya.ru/referat-po-istorii-tehnika-eyo-vliyanie-na-zhizn-cheloveka.html
  • textbook.bystrickaya.ru/grigoryan-aa-o-probleme-vozniknoveniya-teorii-veroyatnostej-novaya-biblioteka-gumanitarnogo-obrazovaniya.html
  • crib.bystrickaya.ru/grafik-zanyatosti-kabineta-fiziki-pasport-kabineta-fiziki.html
  • occupation.bystrickaya.ru/metodicheskie-ukazaniya-po-izucheniyu-disciplini-dlya-studentov-zaochnoj-formi-obucheniya-specialnosti.html
  • vospitanie.bystrickaya.ru/zadachej-centra-yavlyaetsya-organizaciya-distancionnoj-formi-obrazovaniya-po-specialnostyam-poligraficheskogo-profilya.html
  • tests.bystrickaya.ru/metodicheskie-rekomendacii-k-kursu-obshie-osnovi-pedagogiki.html
  • urok.bystrickaya.ru/programma-po-discipline-osnovi-radiofiziki-dlya-specialnosti-014200-biohimicheskaya-fizika-realizuemoj-na-fizicheskom-fakultete.html
  • pisat.bystrickaya.ru/spravochnik-bazovih-cen-na-inzhenernie-iziskaniya-dlya-stroitelstva-inzhenerno-geodezicheskie-iziskaniya-stranica-5.html
  • apprentice.bystrickaya.ru/vospominanie-o-budushem-lentaru-httpwwwlentaru-03102006-00000-boris-grizlov-monitoring-smi-4-oktyabrya-2006-g.html
  • tetrad.bystrickaya.ru/uchebno-metodicheskij-kompleks-rabochaya-uchebnaya-programma-dlya-studentov-napravleniya-100200-62-turizm.html
  • institut.bystrickaya.ru/ti-umeesh-horosho-uchitsya-stranica-4.html
  • education.bystrickaya.ru/1-trmisi-tmen-otbasindai-balalara-ala-sirtindai-zhne-mektep-zhanindai-lagerlerde-demaluin-sinu-memlekettk-izmet.html
  • knigi.bystrickaya.ru/sluchaj-38-puteshestviya-dushi.html
  • lektsiya.bystrickaya.ru/pravila-po-ohrane-truda-v-lesozagotovitelnom-derevoobrabativayushem-proizvodstvah-i-pri-provedenii-lesohozyajstvennih-rabot-pot-rm-001-97-stranica-27.html
  • textbook.bystrickaya.ru/gosudarstvennoe-regulirovanie-strahovoj-deyatelnosti-3.html
  • thesis.bystrickaya.ru/prakticheskaya-rabota-oformlenie-slajdov.html
  • literature.bystrickaya.ru/chelovecheskoe-obshestvennoe-duhovnoe-m-zh-burkeev-doktor-him-nauk-professor.html
  • shkola.bystrickaya.ru/tematicheskij-plan-pervichnoj-specializacii-internaturi-po-specialnosti-epidemiologiya-srok-obucheniya-1728-chas-48-ned.html
  • © bystrickaya.ru
    Мобильный рефератник - для мобильных людей.